核酸检测督导员实践过程记录及感悟3篇

核酸检测督导员实践过程记录及感悟3篇核酸检测督导员实践过程记录及感悟　实　习　报　告　题　目：　食品营养与检测实习报告　农产品检测　学　院：　海洋学院　专业班级：　08食品营养与检测　学　号：　学生姓名：下面是小编为大家整理的核酸检测督导员实践过程记录及感悟3篇,供大家参考。

篇一：核酸检测督导员实践过程记录及感悟

　习

　报

　告

　题

　 目：

　食品营养与检测实习报告

　 农产品检测

　学

　院：

　 海洋学院

　专业班级：

　08 食品营养与检测

　 学

　号：

　学生姓名：

　 指导教师：

　 职

　称：

　二 O 一

　一 年 六

　月 七日

　食品营养与检测实习报告

　食品安全问题是人民日常比较关心的问题之一， 世界各国和中国都把食品安全作为工作的重点， 也在这个领域做了很多指导和监督工作。

　利用实习期间我加入了鹿泉市农产品综合质检站的队伍， 通过三个月的学习工作， 基本了解农产品综合质检站的工作， 熟悉了实验室的管理和仪器的维护、 保养， 以及农产品质量安全检测技术的要点。

　 一、

　鹿泉市农产品综合质检站工作简介

　（一）、 质检站主要职责：

　 农产品综合质检站是农产品质量安全体系的重要组成部分， 是政府实施基层农产品质量安全管理的重要手段， 承担着为政府提供技术决策、 技术服务和技术咨询的重要职能：

　1、

　承担全市农业生态环境、 农业投入品和农产品生产基地、 农贸市场、 批发市场的农产品质量安全日常性定量检测、 现场快速检测工作；

　2、

　开展农产品质量安全标准的宣传和生产技术培训；

　3、

　承担县级以上农业行政主管部门下达的检测任务；

　4、

　参与农产品质量安全例行监测和信息发布制度；

　5、

　定期对农产品生产基地、 农业龙头企业、 农业专业合作社、 农业标准化示范区、“三品”认证单位的产品抽检， 发布抽检结果的信息， 分析监测结果； 指导、 帮助有关镇和基地、企业建立健全农产品质量安全自检机制， 开展正常性检验检测工作。

　6、 承担着为政府提供技术决策、 技术服务和技术咨询的重要职能。

　 作为农业局附属单位农业技术推广中心的一个部门， 质检站工作的开展是在上级的领导下，按照上级有关部门的要求完成既定任务。

　由于该站是非营利性政府机构， 所有费用都是由政府支付，所以在实验过程中要用到的材料都必须要先写报告申请经费获批准后再开展检测任务。

　作为区级的检测中心， 所有任务的开展都要与镇级农办联系以确保工作的顺利进行。

　 （二）、 质量方针和目标：

　 1、

　质量方针：

　质量第一， 科学， 准确， 公正。

　2、

　质量目标：

　建立和完善质量体系， 贯彻“质量第一” 的方针， 坚持质量与检验速度相统一的观点， 对可能影响检验质量的诸因素进行有效的控制， 通过科学的检验分析， 对畜产品，兽药， 饲料， 农产品的质量作出科学准确、 公正的评价。

　3、

　确保量值得统一和数据的准确， 报告差错率＜2%；

　4、

　检测人员上岗前培训考核合格率 100%；

　5、

　报告的延时率＜1%；

　6、

　长远质量目标：

　加强人员培训考核， 增强仪器设备更新投入， 建立健全科学管理体系， 把本站建设成为全国一流的农产品质量监测机构。

　 （三）、 检测工作流程图：

　 上级的检测任务——业务室编制计划——主任、 副主任批准——业务室组织抽样——业务室收样登记编号——样品制备——下达检测任务——检测室领取样品实施检测——填写原始记录及数据处理——校核——技术负责人审核——业务室编制检验报告——质量负责人审核——中心主任签发——报告盖章——副本与原始记录存档——正本送受检（送）

　单位——若有抱怨， 按抱怨处理程序处理

　二、 实习主要内容和要点

　（一）、 实验室管理和维护：

　 检测站作为一个精确度要求较高的实验室， 它的管理是比较严格的。

　非实验人员不允许进出实验室， 实验员进出实验室要锁门。

　进实验室前要换拖鞋并穿上实验服， 实验员进行检测时必须带上防护口罩和手套以确保人身安全， 必要时要开抽风机保持室内空气清洁， 所排出废气是通过除毒处理。

　实验仪器和实验试剂由实验员定期检查， 确保实验仪器的正常运作和试剂质量符合实验要求。实验室内部的清洁卫生必须由实验员负责以保证实验器材完好， 实验废品统一严格处理， 实验室外部的清洁卫生由专人负责。

　作为实验员对实验结果要保密， 实验结果上送有关单位并保存实验样品以备复检的需要。

　 （二）、 实验主要流程：

　 1、 一个完整的检测程序包括：

　样本的采集， 样品预处理， 样本的存储， 提取样品中的被检物质， 被检物质的测定， 结果分析等步骤。

　2、 样本来源主要有两种方式：

　一是有关单位、 市场、 基地或者个人向检测站送样本； 另外一种就是站内派人到一般市场、 超市、 批发市场、 基地等采集样本。

　样本的采集依据分地区随机原则，尽量使样本检测结果更加符合实际情况。

　检测样品对样品负责是检测的原则， 所以所有样品都要贴上标签， 记录采集的地点、 时间、 样本名称等池塘水样还要记录联系人。

　采集样本要经过一段时间才可能送回实验室， 所以要要在样本箱里加几个冰袋保持样本新鲜。

　3、 根据不同检测对象， 样本的预处理各不相同。

　农药残留的处理是比较简单的， 剪 1 克菜叶就可以了， 当然剪出来的菜也要讲究的， 不能太粗也不能从太细， 而带有很重气味的菜如葱、 蒜、韭菜、 芹菜等就不能剪细取整棵检验。

　兽药残留的预处理， 鱼取脊背肉， 猪通常取猪肝， 而鸡就取鸡肝， 所有样品都要及时处理， 搅碎后分别装进对应的样本瓶并放进冰箱冷藏保存。

　4、 样本的处理， 根据实验原理农残的测定用有机提取液提取有机磷等农药， 然后用胆碱酶与提取物反应， 最后加上显色液和底物液这样就完成样本处理， 可以进行检测。

　鱼、 鸡、 猪样品提取步骤比较复杂， 总的来说是利用兽药溶于有机溶液的原理， 通过振荡、 冷冻离心、 吸取上清、 吹干、再溶解、 振荡、 离心、 取上清等步骤， 然后利用酶联吸的原理检测。

　5、 检测和实验结果的分析通过实验仪器和电脑系统即可获得， 所检测到的结果要保存好， 对于检测阳性的样本必要时要复检一次。

　 （三）、 畜产品检测计划：

　 1、 每月定期抽查一次奶站、 饲料厂， 检测内容：

　三聚氰胺、 β -内酰胺酶、 硫氰酸钠等。

　2、 指导各防疫分站、 屠宰点开展生猪出栏前和屠宰前猪尿的盐酸克伦特罗、 莱克多巴胺检测。

　3、 对城区超市、 两个屠宰点、 集贸市场猪肉进行瘦肉精和沙丁胺醇检测。

　4、 目前我站已开展检测项目：

　饲料牛奶三聚氰胺专项检测， 牛奶β -内酰胺酶、 硫氰酸钠， 猪肉的盐酸克伦特罗及沙丁胺醇检测。

　 （四）、 主要使用仪器：

　原子吸收、 农药快速检测仪、 高效气相/液相色谱仪、 紫外可见分光光度计、 氨基酸分析仪、粗纤维测定仪、 酶标定性仪等

　三、 实习期间的体会

　 （一）、

　踏出校园走进社会参加实习， 不是用三言两语就可以概括实习收获， 社会的大课堂是纷繁复杂要学习的知识是在太多了。

　工作时遵守工作纪律， 与同事融洽相处是基本的要求。作为实习生还要积极肯干， 同时要放下所谓的面子， 不懂的地方要问个究竟踏踏实实地学习，接受新事物时要有很强的求知欲， 力争更多的动手机会。

　实习期间我认真刻苦， 吃苦耐劳， 有上进心， 为人诚恳， 虚心好学， 能够正确对待、 处理生活及工作中遇到各种困难， 思想积极上进， 接受能力和独立能力强， 有很强的团队精神和集体荣誉感，做事认真负责有很强的责任心， 有强烈的上进心、 事业心， 有很强的环境适应能力， 能很快融入集体。

　 （二）、 不能不提的就是实习期间我真正懂得了要珍惜在学校学习的时光， 一方面不要认为学习没用， 因为以后要用到什么知识还是未知之数， 离校工作的人都会有书到用时方恨少的感慨； 另一方面， 走出社会你的同事绝大多数都不是你的同龄人， 你要学习怎样去融合他们做到妥善处理人际关系。

　在这两个多月的实习里， 在领导和同事的指导下， 向行业学习知识， 向同事请教经验， 传授工作技巧， 正是在这个过程中， 认识到自己的不足， 并积极改善， 提高自己的水平。

　在工作中遇到不懂的地方， 能够虚心向富有经验的前辈请教， 善于思考， 能够举一反三， 对于别人提出的工作建议， 可以虚心听取， 在紧迫的情况下， 加时加班完成任务， 能保证质量的完成工作， 同时， 严格遵守各项规章制度， 遇到不懂的问题， 积极询问同事， 并很快解决。

　在这简短的实习期间， 虽然紧张， 但收获颇丰， 感触良多。

　 （三）、 通过实践磨练我明白到：

　工作不是一个人的事情， 是一个团队在完成一个项目， 在工作的过程中， 如何去保持和团队中其他同事得交流和沟通也是相当重要的， 合理和大家分工， 各尽所长， 团结合作， 共赴成功； 明白了不能将个人利益凌驾于团体利益之上， 在团队工作中， 会出现自己的协助下同时也从中受益的情况下， 自身也受益其中， 这也是保证自己成功的最重要的因素之一。

　得益于实习期间的采样， 走了很多地方， 较为深入地了解了鹿泉市的发展现状， 尤其是农业方面的发展情况和鹿泉市农产品质量安全的情况， 对于以后的就业前景也有一定的认知。

　我相信通过

　自身不断努力， 拿出干劲， 胸怀壮志， 不断提高自身的综合素质， 在社会的接触过程中， 减少磨合期的碰撞， 加快融入社会的步伐， 才能在人才高地上站稳脚跟， 才能扬起理想的风帆， 驶向成功的彼岸。

篇二：核酸检测督导员实践过程记录及感悟

　１０． １１８１６ ／ ｃｎ． ｎｉ． ２０２０ － ２０６０４３·论 　著·开放科学（资源服务）标识码（ ＯＳＩＤ ）：新型冠状病毒实验室核酸检测方法及实践匡慧慧 １ ，于梅 １ ，于帅 ２ ，周汉王 １ ，王依函 ２ ，朱乔 ３ ，肖征 １ ，李慧灵 ２（ １．解放军总医院海南医院检验中心２．热带医学科３．中心实验室，海南 三亚５７２０００ ）摘要：目的 　 研究新型冠状病毒（ ２０１９ － ｎＣｏＶ ）实验室核酸检测的原理方法，探讨实时荧光定量 ＰＣＲ方法在新型冠状病毒实验室检测中的价值与实验室注意事项。方法 　 采用实时荧光定量 ＰＣＲ方法检测２０２０年１月２３日－２０２０年２月２日就诊于解放军总医院海南医院发热门诊的患者以及筛查的湖北旅居者的咽拭子，采用实时荧光定量ＰＣＲ的方法检测新型冠状病毒开放读码框１ａｂ （ ＯＲＦ１ａｂ ）、核壳蛋白（ Ｎ ）基因。结果 　 共检测的３　８２４例标本中，阳性病例３５例，阳性率０． ９１％ 。结论 　 疫情期间对发热门诊患者及湖北旅居者进行２０１９ － ｎＣｏＶ核酸筛查是非常有必要的，实时荧光定量ＰＣＲ是一种检测２０１９ － ｎＣｏＶ科学可靠的方法，能快速准确地检测待检标本中的 ２０１９ － ｎＣｏＶ核酸，对监测和控制疫情有重要意义。关键词：新型冠状病毒；新型冠状病毒肺炎；实时荧光定量ＰＣＲ ；核酸；实验室检测中图分类号：

　Ｒ３７３　　 文献标识码：

　Ａ　　 文章编号：

　１００５－ ４５２９ （ ２０２０ ）

　０６ － ０８２７ － ０４收稿日期：

　２０２０ － ０２ － １２ ；　 修回日期：

　２０２０ － ０２ － １５通讯作者：肖征， Ｅ － ｍａｉｌ ：ｘｚ３０１＠ｓｉｎａ． ｃｏｍ　　　　 李慧灵， Ｅ － ｍａｉｌ ：

　ｌｉｈｕｉｌｉｎｇ１９７５＠１２６． ｃｏｍＤｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　ｏｆ　２０１９ － ｎＣｏＶｉｎ　ｍｅｄｉｃａｌ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｐｒａｃｔｉｃｅＫＵＡＮＧ　Ｈｕｉ － ｈｕｉ ， ＹＵ　Ｍｅｉ ， ＹＵ　Ｓｈｕａｉ ， ＺＨＯＵ　Ｈａｎ － ｗａｎｇ ， ＷＡＮＧ　Ｙｉ － ｈａｎ ， ＺＨＵ　Ｑｉａｏ ，ＸＩＡＯ　Ｚｈｅｎｇ ， ＬＩ　Ｈｕｉ － ｌｉｎｇ（ Ｈａｉｎａｎ 　Ｈｏｓｐｉｔａｌ ， ＰＬＡ 　 Ｇｅｎｅｒａｌ 　 Ｈｏｓｐｉｔａｌ ， Ｓａｎｙａ ， Ｈａｉｎａｎ 　５７２０００ ， Ｃｈｉｎａ ）Ａｂｓｔｒａｃｔ ：

　ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　 ｔｈｅ　ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　ｏｆ　２０１９ － ｎＣｏＶ　ｉｎ　ｍｅｄｉｃａｌ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ， ｅｘ －ｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｒｅａｌ － ｔｉｍｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ＰＣＲ　ｉｎ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　 ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　２０１９ － ｎＣｏＶ ， ａｎｄ　ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｔｈｅ　ｍａｔｔｅｒｓ　ｔｈａｔ　ｎｅｅｄ　ｔｈｅ　ａｔｔｅｎｔｉｏｎ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ｆｒｏｍ　Ｊａｎ．２３ ， ２０２０ｔｏ　Ｆｅｂ．２ ， ２０２０ｔｈｅ　ｔｈｒｏａｔ　ｓｗａｂ　ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ　ｏｆｔｈｅ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｏｆ　ｆｅｖｅｒ　ｃｌｉｎｉｃ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｃｒｅｅｎｅｄ　ｐｅｏｐｌｅ　ｗｈｏ　ｈａｄ　ｔｈｅ　ｈｉｓｔｏｒｙ　 ｏｆ　ｔｒａｖｅｌｌｉｎｇ　 ｏｒ　ｌｉｖｉｎｇ　 ｉｎ　Ｈｕｂｅｉ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｉｎ　Ｈａｉｎａｎ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ ， ＰＬＡ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｒｅａｌ － ｔｉｍｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ＰＣＲ ， ａｎｄｔｈｅ　ｔｗｏ　ｇｅｎｅｓ ， ２０１９ － ｎＣｏＶ　ｏｐｅｎ　ｒｅａｄｉｎｇ　 ｆｒａｍｅ　１ａｂ （ ＯＲＦ１ａｂ ）

　ａｎｄ　ｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ （ Ｎ ）

　ｇｅｎｅ ， ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅｕｓｅ　ｏｆ　ｒｅａｌ － ｔｉｍｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ＰＣＲ．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ｏｆ　ｔｏｔａｌｌｙ　 ３　８２４ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ ， ３５ｗｅｒｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ ， ｗｉｔｈ　ｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒａｔｅ　０． ９１％．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮＩｔ　ｉｓ　ｖｅｒｙ　 ｎｅｃｅｓｓａｒｙ　 ｔｏ　ｃｏｎｄｕｃｔ　ｔｈｅ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｔｅｓｔ　ｏｆ　ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　ｏｆ　２０１９ － ｎＣｏＶｆｏｒ　ｔｈｅ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｏｆ　ｆｅｖｅｒ　ｃｌｉｎｉｃ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｅｏｐｌｅ　ｗｈｏ　ｈａｖｅ　ｔｈｅ　ｈｉｓｔｏｒｙ　 ｏｆ　ｔｒａｖｅｌｌｉｎｇ　 ｏｒ　ｌｉｖｉｎｇ　 ｉｎ　Ｈｕｂｅｉ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　ｄｕｒｉｎｇｔｈｅ　ｅｐｉｄｅｍｉｃ ， ｔｈｅ　ｒｅａｌ － ｔｉｍｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ＰＣＲ　ｉｓ　ａ　ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　ａｎｄ　ｒｅｌｉａｂｌｅ　ａｐｐｒｏａｃｈ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　２０１９ －ｎＣｏＶ ， ｉｔ　ｃａｎ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　ｒａｐｉｄｌｙ　 ａｎｄ　ａｃｃｕｒａｔｅｌｙ　 ａｎｄ　ｈａｓ　ｇｒｅａｔ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ｉｎ　ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ　 ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆｔｈｅ　ｅｐｉｄｅｍｉｃ．Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ ：

　２０１９ － ｎＣｏＶ ； ＣＯＶＩＤ － １９ ； Ｒｅａｌ － ｔｉｍｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ＰＣＲ ； Ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄ ； Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　 ｔｅｓｔ　　２０１９ 年 １２ 月，在湖北武汉暴发一种以肺炎为特征的呼吸系统疾病，２０２０年１月１２日，经分离鉴定，确认病原为一种新型冠状病毒，国际病毒分类学委员会命名为“２０１９ － ｎＣｏＶ ”［ １ ］ 。病毒在武汉市首发，并迅速蔓延至全国各省市。冠状病毒是单股正链 ＲＮＡ 病毒，广泛存在于自然界中。以前流行的人冠状病毒，主要包括６种，分别是２２９Ｅ株、 ＯＣ４３株、 ＮＬ６３株和 ＨＫＵ１株，以及近些年发现的致病性更高的人冠状病毒的新成员，即２００２－２００３年的严重急性呼吸系统综合征冠状病毒（ Ａｃｕｔｅ　ｒｅｓｐｉｒａ－ｔｏｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ， ＳＡＲＳ － ＣｏＶ ）、 ２０１２ 年的中东呼吸系统综合征冠状病毒（ Ｍｉｄｄｌｅ　ｅａｓｔ　ｒｅ－ｓｐｉｒａｔｏｒｙ　 ｓｙｎｄｒｏｍｅ　ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ， ＭＥＲＳ － ＣｏＶ ）［ ２ － ３ ］ 。·０ ３ ８· 中华医院感染学杂志２０２０年第３０卷第６期 Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｎｏｓｏｃｏｍｉｏｌ　Ｖｏｌ． ３０Ｎｏ． ６　２０２０

　２０１９年的新型冠状病毒，被称为第７种人冠状病毒 ［４ ］ 。新型冠状病毒肺炎（ＣＯＶＩＤ － １９ ）是由新型冠状病毒感染所导致的肺部炎症，人群普遍易感，呼吸道飞沫传播和接触传播是主要传播途径，气溶胶和消化道等传播途径尚待明确。

　ＣＯＶＩＤ － １９诊疗方案（试行第五版）［ ５ ］ 规定，临床诊断病例或疑似病例具备呼吸道标本或血液标本实时荧光 ＲＴ － ＰＣＲ 检测２０１９ － ｎＣｏＶ核酸阳性或病毒测序且与已知的２０１９ －ｎＣｏＶ高度同源两种病原学诊断证据之一者，即为确诊病例。病原学检测在 ＣＯＶＩＤ － １９诊断中是金标准。由于病毒测序技术、人员、设备要求较高 ［６ ］ ，所以核酸检测便成为目前２０１９ － ｎＣｏＶ 确诊中使用最为广泛的方法。现将实时荧光定量 ＰＣＲ 方法检测 ２０１９ － ｎＣｏＶ 在医院病例中的应用情况以及实验室检测过程中的经验总结报告如下。１　 材料与方法１． １　 材料１． １． １　 病例来源 　 选取 ２０２０ 年 １ 月 ２３ 日 －２０２０年２月３日就诊于解放军总医院海南医院发热门诊的患者和医院主动筛查的湖北籍游客或密切接触者，共３　８２４个病例。１． １． ２　 试剂与仪器 　 采用中山大学达安基因股份有限公司生产的核酸提取试剂盒、２０１９ － ｎＣｏＶ 核酸检测试剂盒。核酸提取采用 ＤＡ３２００ 核酸提取仪（中山大学达安基因股份有限公司），产物扩增采用ＡＢＩ７５００ 型 ＰＣＲ 仪（美国 Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆ －ｉｃ ）。１． ２　 方法１． ２． １　 标本采集 　 采取疑似患者咽拭子作为检测标本，采用植绒拭子在患者悬雍垂与扁桃体两侧反复刮取后置于病毒保存液中，采集后的咽拭子用有明显生物安全标志的密封袋包装好，按高危生物安全物品转运至新冠核酸检测实验室。由于采集标本的成功与否对核酸检测结果影响很大，采集时一定要注意采集手法，如采集部位和力度，以及刮取的圈数等。１． ２． ２　 核酸提取及产物扩增 　 采用磁珠法提取核酸，试剂盒含磁珠结合液、磁珠洗涤液、洗脱液及蛋白酶 Ｋ 。按照中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所官网２０２０年１月２１日公布２０１９ － ｎＣｏＶ 核酸引物和探针序列设计引物和探针 ［７ ］ ，推荐选用针对２０１９ － ｎＣｏＶ 的开放读码框 １ａｂ （ ｏｐｅｎ　ｒｅａｄｉｎｇ　 ｆｒａｍｅ ，ＯＲＦ１ａｂ ）、核壳蛋白（ Ｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ ， Ｎ ）基因区域的引物和探针。

　Ｔａｒｇｅｔ　１ （ ＯＲＦ１ａｂ ）：正向引物（Ｆ ）：ＣＣＣＴＧＴＧＧＧＴＴＴＴＡＣＡＣＴＴＡＡ ，反向引物（ Ｒ ）：ＡＣＧＡＴＴＧＴＧＣＡＴＣＡＧＣＴＧＡ ；荧光探针（ Ｐ ）：

　５′ －ＦＡＭ － ＣＣＧＴＣＴＧＣＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＡＡＧＧＴＴＡＴ －ＧＧ － ＢＨＱ１ － ３′ 。

　Ｔａｒｇｅｔ　２ （ Ｎ ）：正向引物（ Ｆ ）：

　ＧＧＧ －ＧＡＡＣＴＴＣＴＣＣＴＧＣＴＡＧＡＡＴ ，反 向 引 物 （ Ｒ ）：ＣＡＧＡＣＡＴＴＴＴＧＣＴＣＴＣＡＡＧＣＴＧ ； 荧 光 探 针（ Ｐ ）：

　５′－ ＦＡＭ － ＴＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＴＧＡＣＡＧＡＴＴ －ＴＡＭＲＡ － ３′ 。１． ２． ３　 结果解读分析 　 采用含内源性检测系统（内标，ＩＣ ）的试剂，用于对标本采集、核酸提取及扩增过程进行监控，减少假阴性结果出现。样本检测同时需进行阴性质控品和阳性质控品检测。结果分析时首先查看阴阳性质控品结果，阴性质控品 ＯＲＦ１ａｂ基因和 Ｎ 基因均无明显扩增曲线，ＩＣ有明显扩增曲线；阳性质控品 ＯＲＦ１ａｂ基因和 Ｎ 基因均应有明显扩增曲线，且 ｃｔ 值 ≤３２ 。一次实验需阴性质控品和阳性质控品均满足要求，此次实验方有效，否则视为实验无效，需重新检测。单个样本结果ｃｔ参考值需参照试剂盒要求，结果分析参照以下模式：（１ ）当ＩＣ 曲线 Ｓ型扩增，且ＯＲＦ１ａｂ 和 Ｎ 基因同时扩增阳性时（ ｃｔ≤４０ ），可判断为样本２０１９ － ｎＣｏＶ 核酸阳性。（ ２ ）当ＩＣ 曲线 Ｓ型扩增，且 ＯＲＦ１ａｂ和 Ｎ 基因均无明显扩增时（ｃｔ＞４０），可判断为样本２０１９ － ｎＣｏＶ 核酸阴性。（ ３ ）当ＩＣ 曲线 Ｓ 型扩增， ＯＲＦ１ａｂ 或 Ｎ 基因单通道扩增阳性时（ｃｔ≤４０ ），建议重新采集标本复核，复核结果一致时，可 判 断 为 样 本 ２０１９ － ｎＣｏＶ 核 酸 阳 性，报 告ＯＲＦ１ａｂ或 Ｎ 单基因阳性；复核结果为双基因均阴性时，可判断为样本２０１９ － ｎＣｏＶ 核酸阴性。（ ４ ）当ＩＣ曲线无明显Ｓ型扩增时，提示核酸提取失败，需重测该样本；若重测后ＩＣ曲线仍无明显扩增，需重新采集标本进行检测。１． ２． ４　 实验室生物安全管理 　 实验室安全管理严格按 照 国 家 卫 生 健 康 委 员 会 公 告 （ ２０２０ 年 第 １号）［ ８ ］ 规定要求，ＣＯＶＩＤ － １９纳入法定传染病乙类管理，采取甲类传染病的预防、控制措施。核酸实验室基本防护用品包括 Ｎ９５口罩、医用防护帽、护目镜、防护服、鞋套、乳胶手套等。并严格按照核酸检测实验室要求进行分区设置与检测流程设置。实验室所有垃圾均视为有传染性医疗垃圾，统一装在医用垃圾袋中并用封口带封口后带离实验室，在实验室旁进行高压灭菌。１． ３　 统计分析 　 通过 ＳＰＳＳ　２０． ０ 统计软件进行数据分析，计数资料采用例数或百分比表示。·１ ３ ８· 中华医院感染学杂志２０２０年第３０卷第６期 Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｎｏｓｏｃｏｍｉｏｌ　Ｖｏｌ． ３０Ｎｏ． ６　２０２０

　２　 结 　 果　　 受检的３　８２４例病例中， ２０１９ － ｎＣｏＶ 核酸阳性３５例，阴性３　７８９例，阳性率０． ９２％ 。阳性患者中年龄最小者８岁，最大者７４岁，年龄中位数３７岁（２７ ，６２． ５ ）；男性患者１２例，占３４． ２９％ ，女性患者２３例占６５． ７１％ 。３　 讨 　 论实时荧光定量ＰＣＲ方法具有敏感性高，特异性好，操作简单等特点，已被广泛应用于各种病原学检测领域 ［９ － １１ ］ 。研究的３　８２４例病例中，２０１９ － ｎＣｏＶ核酸阳性率和阳性患者基本情况，与文献报道的武汉地区均各不相同 ［１２ ］ ，可能原因是各地区人群不一样，本研究中的人群主要以旅居三亚的湖北籍人员为主。２０２０ 年 １ 月 ２０ 日，国家卫生健康委员会公告（２０２０ 年第 １ 号）［ ８ ］ 规定：根据《传染病防治法》的相关规定，基于目前对 ＣＯＶＩＤ － １９ 的病原、流行病学、临床特征等特点的认识，报国务院批准同意，国家卫生健康委决定将 ＣＯＶＩＤ － １９纳入法定传染病乙类管理，采取甲类传染病的预防、控制措施。各级人民政府、卫生健康行政部门、其他政府部门、医疗卫生机构可以依法采取患者隔离治疗、密切接触者隔离医学观察等系列防控措施，共同预防控制 ＣＯＶＩＤ －１９ 疫情的传播。按照新型冠状病毒肺炎核酸检测专家共识 ［１３ ］ ，２０１９ － ｎＣｏＶ 核酸检测须在生物安全三级实验室，或者经过严格生物安全评估后可在二级生物安全实验室加三级生物安全防护下开展。因此，２０１９ － ｎＣｏＶ实验室检测的生物安全问题成为检验领域讨论最为广泛的问题，鉴于２０１９ － ｎＣｏＶ 的高风险性，设计实验流程时也应在各个环节注意生物安全防护。每组两个人同时进试验区，按规范穿戴防护用品，穿戴完成后相互检查并纠正，确保防护有效。目前很多实验室拥有全自动提取仪，但鉴于２０１９ － ｎＣｏＶ的高传染性，不宜用 自 动 设 备 直 接 加样，因为仪器加样时会使开盖样本在实验室暴露时间过久，同时取样头在运行过程中移动和去除时的动作容易产生气溶胶，增加了实验室暴露机会。所以建议采用手工方式进行加样，即在生物安全柜中先将蛋白酶 Ｋ加入含裂解液的加样孔中，再将采集拭子的样本液加至加样孔底部，一次到位，不要来回吹打混匀。加样完成后将 ９６ 孔板置于生物安全柜中静置不少于１０ｍｉｎ ，以保证充分裂解与核酸释放，同时减少实验室感染风险。样本手工操作必须在生物安全柜中进行，生物安全防内放置小型垃圾桶，套医疗垃圾袋，并倒入适量含氯消毒液。所有加样后的枪头均丢弃在含消毒液的垃圾桶中，每次实验结束后收取小垃圾桶内垃圾袋，密封后弃于安全柜外的大垃圾桶中。每次实验结束后，首先用７５％酒精喷洒生物安全柜，再用一次性纸巾擦拭；实验室台面均用１　０００ｍｇ／ Ｌ的有效氯消毒液或者７５％酒精擦拭消毒；实验室地面采用１　０００ｍｇ／ Ｌ的有效氯消毒液拖地消毒。消毒液须新鲜配置，配置时间 ＜２４ｈ 。台面地面都消毒后，打开生物安全柜、提取仪等设备内置的紫外消毒灯，消毒时间 ＞３０ｍｉｎ ；打开实验室固定紫外消毒灯，消毒时间 ＞１ｈ 。工作结束时将所有消毒措施记录于实验室消毒登记表中。特别注意，实验室所有垃圾均视为有传染性医疗垃圾，统一装在医用垃圾袋中并用封口带封口后带离实验室，在实验室旁进行高压灭菌。由于标本采样、患者病程、试剂来源、操作实验室等因素的影响，已出现多例的连续多次核酸检测阴性又转阳性的病例，给检疫防疫带来一定困惑。在得到一个阳性（或阴性）结果时，如何判断其诊断价值，也需要参考该被检查者是处于高患病率人群还是低患病率人群 ［１４ ］ 。鉴于防疫工作的重要性，应不放过任何一个可能的阳性或可疑结果，在不确定的情况下，均应按疑似处理，建议对患者采取相应的隔离、监管措施。也有报道过肺部 ＣＴ 在一些核酸阴性患者中的诊断价值 ［１５ ］ 。对具有比较典型的临床表现或明确的接触史的患者，即使核酸阴性，也应按照国家相关管理条例进行隔离管理，以免造成更大范围的传染。本研究中所有标本类型均为咽拭子，已有少量病例报道２０１９ － ｎＣｏＶ 核酸检测痰标本的敏感性高于咽拭子 ［１６ ］ ，但是使用痰标本检测会增加痰液化这一步流程，也会存在因液化不理想而导致的假阴性结果。了解２０１９ － ｎＣｏＶ 在咽拭子、痰液、血液及粪便不同标本中的病毒含量及存在时间，是实验室诊断ＣＯＶＩＤ － １９病例及判断病例治愈的重要环节，在此后工作中，需进一步收集更多的数据进行比较分析。目前国内已有多家核酸检测试剂生产，并已有至少７家获得国家药械注册证。由于疫情紧急，故试剂的生产使用尚缺乏大量的临床应用数据（包括已获证产品）。建议首先应选择有注册证的产品，其次在产品使用初期，既不一味盲信手中试剂，也不能一概否认他家使用产品，应综合考评。不可否认，核酸检测在目前２０１９ － ｎＣｏＶ诊断中的重要作用，但正·２ ３ ８· 中华医院感染学杂志２０２０年第３０卷第６期 Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｎｏｓｏｃｏｍｉｏｌ　Ｖｏｌ． ３０Ｎｏ． ６　２０２０

　确的对待核酸检测的结果，是进一步做好检疫防疫工作需要重视的一个重要方面。参考文献［ １ ］ 　 国际病毒分类委员会将新型冠状病毒命名为 ＳＡＲＳ － ＣｏＶ － ２［ ＥＢ ／ ＯＬ ］ ．ｈｔｔｐ ：／／ ｗｗｗ．ｃｈｉｎａｎｅｗｓ．ｃｏｍ ／ ｇｊ ／ ２０２０ ／ ０２ － １２ ／９０８８３１４． ｓｈｔｍｌ［ ２ ］ 　Ｋａｈｎ　ＪＳ ， Ｍｃｉｎｔｏｓｈ　Ｋ．Ｈｉｓｔｏｒｙ　 ａｎｄ　ｒｅｃｅｎｔ　ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　ｃｏｒｏｎａ －ｖｉｒｕｓ　ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ［ Ｊ ］ ．Ｐｅｄｉａｔｒ　Ｉｎｆｅｃｔ　Ｄｉｓ　Ｊ ， ２００５ ， ２４ （ １１Ｓｕｐｐ ）：Ｓ２２３ － Ｓ２２７．［ ３ ］ 　Ｄｅ　Ｇｒｏｏｔ　Ｒ ， Ｂａｋｅｒ　Ｓ ， Ｂａｒｉｃ　Ｒ ， ｅｔ 　 ａｌ ．Ｍｉｄｄｌｅ　Ｅａｓｔ　ＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＳｙｎｄｒｏｍｅ　Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ （ ＭＥＲＳ － ＣｏＶ ）：

　ａｎｎｏｕｎｃｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅＣｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ　Ｓｔｕｄｙ　 Ｇｒｏｕｐ ［ Ｊ ］ ．Ｊ　Ｖｉｒｏｌ ， ２０１３ ，８７ （ １４ ）：

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　１２１８ － １２２０．［ １２ ］ 　 Ｗａｎｇ　 Ｄ ， Ｈｕ　Ｂ ， Ｈｕ　Ｃ ， ｅｔ 　 ａｌ ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　１３８ｈｏｓｐｉｔａｌｉｚｅｄ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　２０１９ ｎｏｖｅｌ　ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ － ｉｎｆｅｃｔｅｄｐｎｅｕｍｏｎｉａ　ｉｎ　Ｗｕｈａｎ ， Ｃｈｉｎａ ［ Ｊ ］ ．ＪＡＭＡ ， ２０２０ ， Ｆｅｂ．ＤＯＩ ：

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　１１５７ － １１６２．［ １５ ］ 　Ｘｉｅ　Ｘ ， Ｚｈｏｎｇ　 Ｚ ， Ｚｈａｏ　Ｗ ， ｅｔ 　 ａｌ ．Ｃｈｅｓｔ　ＣＴ　ｆｏｒ　ｔｙｐｉｃａｌ　２０１９ －ｎＣｏＶ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａ ：

　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　 ｔｏ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ＲＴ － ＰＣＲ　ｔｅｓｔｉｎｇ［ Ｊ ］ ． Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ．２０２０ ：

　２００３４３． ｄｏｉ ：

　１０．１１４８ ／ ｒａｄｉｏｌ．２０２０２００３４３． ［ Ｅｐｕｂ　ａｈｅａｄ　ｏｆ　ｐｒｉｎｔ ］［ １６ ］ 　 陈炜，张春阳，朱颖，等 ．４ 例新型冠状病毒感染病例咽拭子与痰标本病毒核酸检测的比较［ Ｊ ／ ＯＬ ］ ． 中国人兽共患病学报：１ －７ ［ ２０２０ － ０３ － １８ ］ ．ｈｔｔｐ ：／／ ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ ／ ｋｃｍｓ ／ ｄｅｔａｉｌ ／ ３５．１２８４．Ｒ．２０２００２１１． ２１１８． ００２． ｈｔｍｌ．·３ ３ ８· 中华医院感染学杂志２０２０年第３０卷第６期 Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｎｏｓｏｃｏｍｉｏｌ　Ｖｏｌ． ３０Ｎｏ． ６　２０２０

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